Fissaidee 3

Un polimorfismo nella lunghezza dei frammenti di restrizione (RFLP) può essere rilevato mediante elettroforesi su gel di agarosio di un DNA prima amplificato mediante PCR e in seguito incubato con un enzima di restrizione. Il gel di agarosio in cui vengono caricati i campioni di DNA viene esposto ad un campo elettrico in modo che i segmenti di DNA presenti si muovano con una velocità inversamente proporzionale alla propria dimensione. La presenza, alla fine dell’elettroforesi, di un numero variabile di segmenti di DNA, di dimensioni specifiche (in relazione ad uno specifico RFLP), consente di stabilire il genotipo del campione analizzato. Il DNA all’interno del gel di agarosio e durante la corsa elettroforetica non è visibile. La visualizzazione avviene dopo esposizione del gel, con il DNA all’interno, a una sorgente di radiazioni a specifiche lunghezze d’onda che eccitano una molecola (il SYBR Green) che emette una luce fluorescente visibile. Il SYBR Green emette la fluorescenza solo se presente all’interno della doppia elica del DNA, quindi la sua visualizzazione identifica, la posizione del DNA lungo il gel.